色谱柱制备柱作为分离纯化的核心载体，长期运行中易受样品污染、操作不当或溶剂不兼容等因素影响，出现柱压异常升高、峰形拖尾/分叉、保留时间漂移、柱效骤降甚至漏液等问题。若处理不及时，不仅影响分析准确性或制备收率，还可能造成昂贵填料报废。掌握色谱柱
制备柱常见问题快速诊断与科学应对策略，是保障实验连续性的关键。
问题一：系统压力异常升高
原因：筛板堵塞（颗粒物、沉淀盐）、柱头污染、流动相黏度过高或流速过快。
对策：
反向冲洗（仅适用于允许反冲的柱子）：用10–20倍柱体积的强洗脱溶剂（如甲醇/水=9:1）低流速（0.2–0.5mL/min）冲洗；
拆下柱前过滤器或保护柱，检查是否堵塞并更换；
确保样品经0.22μm滤膜过滤，缓冲盐浓度≤20mM且溶解；
制备柱可考虑加装在线过滤器，防止粗品杂质进入。
问题二：峰形拖尾、分叉或不对称
原因：活性位点暴露（硅羟基未封端）、柱头塌陷、样品超载或pH超出柱耐受范围。
对策：
对碱性化合物，添加三乙胺等竞争性碱抑制硅羟基作用；
检查是否使用过高pH（>8）导致硅胶溶解，改用耐高pH柱（如杂化颗粒）；
降低进样量或稀释样品，避免超载；
若柱头已塌陷（可见凹陷），可尝试切除0.5–1cm柱头（仅限制备柱），但会缩短寿命。
问题三：保留时间漂移或重复性差
原因：柱未充分平衡、温度波动、流动相比例不准或固定相流失。
对策：
每次更换流动相后，用10–15倍柱体积冲洗至基线稳定；
使用柱温箱控温（±0.1℃），避免室温波动影响；
校准泵比例阀与混合器，确保梯度准确；
若C18柱在高水相下出现“相塌陷”，可先用高有机相活化再平衡。
问题四：柱效（理论塔板数）显著下降
原因：填料污染、床层干裂、机械震动导致沟流。
对策：
执行深度清洗程序（如先水→甲醇→异丙醇→二氯甲烷→甲醇梯度冲洗）；
避免柱子在无溶剂状态下暴露空气，尤其制备柱停机时务必充满保存液；
运输或移动时用堵头密封，并水平放置防沉降。
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更新时间：2025-11-24 
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